Uma pessoa infectada com minhoca de alfinete é frequentemente assintomática, mas a comichão à volta do ânus é um sintoma comum. O diagnóstico do verme de pinho pode ser alcançado a partir de três técnicas simples. A primeira opção é procurar os vermes no reqion perianal 2 a 3 horas após a pessoa infectada estar a dormir. A segunda opção é tocar a pele perianal com fita transparente para recolher possíveis ovos de vermes de pinho à volta do ânus logo pela manhã. Se uma pessoa estiver infectada, os ovos na fita serão visíveis sob um microscópio. O método da fita deve ser conduzido em 3 manhãs consecutivas logo após a pessoa infectada acordar e antes de fazer qualquer lavagem. Uma vez que a comichão anal é um sintoma comum de pinworm, a terceira opção de diagnóstico é analisar amostras de debaixo das unhas ao microscópio. Uma pessoa infectada que tenha arranhado a área anal pode ter apanhado alguns ovos de minhocas debaixo das unhas que poderiam ser usados para diagnóstico.
Desde que os ovos de minhocas e vermes são frequentemente esparsos nas fezes, o exame de amostras de fezes não é recomendado. Os testes serológicos não estão disponíveis para diagnosticar infecções de vermes de alfinete.